Chromatografie is een methode waarbij gemengde stoffen worden gebruikt die afhankelijk zijn van de snelheid waarmee zij door speciale media, of chemische stoffen, bewegen. Zij bestaat uit een stationaire fase (een vaste stof) en een mobiele fase (een vloeistof of een gas). De mobiele fase stroomt door de stationaire fase. Chromatografie wordt veel gebruikt in de biochemie en de analytische chemie.
Chromatografie
Vlakke-vlakke chromatografie
De stationaire fase is een plat vlak, zoals papier, of een stof op glas.
Papierchromatografie
Papierchromatografie is een techniek voor het scheiden en identificeren van mengsels die gekleurd (kunnen) zijn. Deze techniek is grotendeels vervangen door dunne-laagchromatografie, maar is nog steeds een krachtig leermiddel. Bij dubbele papierchromatografie, ook wel "tweedimensionale chromatografie" genoemd, worden twee oplosmiddelen gebruikt en wordt het papier tussentijds 90° gedraaid. Het is nuttig voor het scheiden van complexe mengsels van verbindingen met vergelijkbare polariteit, bijvoorbeeld aminozuren. De gebruikte verbindingen zorgen er in eerste instantie voor dat je weet of de kleur zuiver is, (slechts één stof) of mengsels (meerdere stoffen).
Dunne laag chromatografie
Dunnelaagchromatografie (TLCC) is een gangbare laboratoriumtechniek die lijkt op papierchromatografie. In plaats van een stationaire fase van papier wordt een dunne laag adsorptiemiddel zoals silicagel, aluminiumoxide of cellulose op een plat substraat gebruikt. Vergeleken met papier heeft het het voordeel van snellere runs, betere scheidingen, en de keuze tussen verschillende adsorbentia. Voor een nog betere resolutie en om kwantificering mogelijk te maken, kan hoogwaardige TLC worden gebruikt.
Kolomchromatografie
Kolomchromatografie scheidt verbindingen door middel van vele chemische acties tussen de te testen chemische stof en de chromatografiekolom (een staaf met een mengsel van speciale chemicaliën). De kolom loopt met behulp van de zwaartekracht of een pomp.
De te testen gemengde stof wordt in een kleine hoeveelheid toegevoegd en wordt afgeremd door een bepaalde chemische of fysische activiteit met de chemicaliën in de chromatografiekolom. De mate van vertraging hangt af van het soort chemicaliën in de te testen stof en de verschillende fasen. Het tijdstip waarop een bepaalde chemische stof elueert (uit het uiteinde van de kolom komt) wordt de "retentietijd" genoemd en er wordt aangenomen dat er slechts één is voor één chemische stof.
De meest gebruikelijke stationaire fase voor kolomchromatografie is silicagel, gevolgd door aluminiumoxide. In het verleden is ook cellulosepoeder gebruikt. De mobiele fase is een zuiver oplosmiddel of een mengsel van oplosmiddelen. Deze wordt zo gekozen dat er zo weinig mogelijk oplosmiddel wordt gebruikt, terwijl de te testen chemicaliën toch duidelijk worden gescheiden.
HPLC
Hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) wordt soms ook hogedrukvloeistofchromatografie genoemd. Het is kolomchromatografie die onder druk wordt uitgevoerd om de snelheid van het proces te verhogen.
Veel gebruikte oplosmiddelen in HPLC zijn mengsels van water of diverse organische vloeistoffen (de meest voorkomende zijn methanol, ethanol of acetonitril).
Vragen en antwoorden
V: Wat is chromatografie?
A: Chromatografie is een proces om de componenten van een mengsel te scheiden op basis van hun bewegingssnelheid door specifieke media.
V: Welke factoren bepalen het resultaat van chromatografie?
A: Het resultaat van chromatografie hangt af van de snelheid waarmee de gemengde stoffen door de speciale media of chemische stoffen bewegen.
V: Wat zijn de twee fasen die betrokken zijn bij chromatografie?
A: Chromatografie bestaat uit een stationaire fase (vaste stof) en een mobiele fase (vloeistof of gas).
V: Hoe beweegt de mobiele fase zich door de stationaire fase in chromatografie?
A: De mobiele fase stroomt door de stationaire fase.
V: Wat zijn de belangrijkste gebieden waarin chromatografie wordt gebruikt?
A: Chromatografie wordt veel gebruikt in de biochemie en analytische chemie.
V: Wat is de stationaire fase in chromatografie?
A: De stationaire fase in chromatografie verwijst naar een vaste stof die een interactie aangaat met de componenten van het mengsel, waardoor ze vertragen of stoppen met bewegen.
V: Wat is de mobiele fase in chromatografie?
A: De mobiele fase in chromatografie verwijst naar een vloeistof of gas dat door de stationaire fase stroomt en de componenten van het mengsel met verschillende snelheden vervoert.