St John Ambulance is een groep van organisaties die eerste hulp en noodgeneeskunde verlenen. Ze werken in meer dan 40 landen, meestal in het Gemenebest van Naties.
De rol van St John Ambulance varieert. In sommige delen van Australië is bijvoorbeeld de St John Ambulance de belangrijkste ambulancedienst. Op de meeste plaatsen zijn de St John Ambulance voornamelijk vrijwilligers en hun rol is het verlenen van eerste hulp bij lokale evenementen (bijv. sportwedstrijden, lokale beurzen, wedstrijden, etc.) en het geven van EHBO-opleidingen aan het publiek.
St John Ambulance wordt gerund door de oprichters, de Eerwaarde Orde van de Heilige Johannes. De Orde is een afstammeling van de Hospitaalridders van de Middeleeuwen. Zij stichtten de eerste tak van de Sint-Jans-ambulance in het Verenigd Koninkrijk in de 19e eeuw. In 1877 werd de St John Ambulance Association opgericht om eerste hulp vaardigheden te onderwijzen. In 1887 werd de St John Ambulance Brigade opgericht om eerste hulp te verlenen bij lokale evenementen. Deze twee zijn sindsdien samengevoegd tot de Engelse tak van St John Ambulance.
EHBO'ers voor St John Ambulance worden vaak gezien in uniform. Oorspronkelijk hadden ze een legerafdeling, maar nu gebruiken veel mensen een niet-militaire afdeling. Sommige takken hebben cadetten, voor tieners en oudere kinderen.
Alle takken van St John Ambulance gebruiken het achtpunts Maltese Kruis als logo. Dit symbool staat op een aantal organisaties die afstammen van de Knights Hospitaller. De Orde van Malta Ambulancekorpsen in Ierland is daar een voorbeeld van. Andere soortgelijke organisaties zijn het Rode Kruis en de Rode Halve Maan (een wereldwijde beweging) en St Andrew's First Aid in Schotland.