Isabella van Castilië (22 april 1451 - 26 november 1504) was een koningin van Castilië en León. Zij was de dochter van Jan II van Castilië en zijn tweede vrouw Isabel van Portugal.
Haar broer, Enrique IV, die koning van Castilië was, wilde haar uithuwelijken. Zij wilde met iemand uit Portugal trouwen om een politieke bondgenoot te maken. Zij trouwde in het geheim met Ferdinand II van Aragon in 1469, en kreeg vijf kinderen met hem. De jongste was Catharina van Aragon, die in 1509 trouwde met Hendrik VIII van Engeland. Isabella was de grootmoeder van Karel I van Spanje (Karel V, keizer van het Heilige Roomse Rijk).
Toen Isabella's broer stierf, werd zij verondersteld de nieuwe koningin te worden. De dochter van haar broer Enriques, Juana, wilde echter koningin worden. Na een oorlog werd Isabella koningin. Tegelijkertijd werd Isabella's man, Ferdinand, koning van Aragon. Zij verenigden het land van Castilië en Aragon in het huidige Spanje. Isabella betaalde mee aan vier van de reizen van Christoffel Columbus om de Amerika's te ontdekken. In hun tijd werden de Amerika's "De Nieuwe Wereld" genoemd. In 1492 tekende zij een wapenstilstand die van Spanje een christelijk land maakte. Na haar dood werd haar dochter Joanna van Castilië koningin.
