Vlekken
Kleuring wordt gebruikt bij microscopie om cellen en weefsels beter te kunnen zien en begrijpen.
Dit is een manier om het contrast in het microscopische beeld te verbeteren. Vlekken en kleurstoffen worden vaak gebruikt in de biologie en de geneeskunde om structuren in biologische weefsels uit te lichten, vaak met behulp van verschillende microscopen.
Kleuring kan plaatsvinden op levend weefsel (in vivo) of op dood weefsel (in vitro).
Geavanceerde microscopie: Nuclei zijn blauw gekleurd met DAPI, microtubles zijn groen gemarkeerd door een antilichaam en actinefilamenten zijn rood gelabeld met falloidine.
Een typische microscoopopstelling. Een gekleurd preparaat op een glazen objectglaasje wordt op de tafel van een microscoop geplaatst.
Bereiding
Dood weefsel moet worden "gefixeerd" zodat het niet vergaat. Het fixeermiddel houdt de structuur zoals die is. Na fixatie kan een weefsel in dunne plakjes worden gesneden en op een reeks glazen microscoopglaasjes worden gelegd. Soms moeten de celmembranen worden opgelost zodat grote kleurstofmoleculen in de cellen kunnen komen. De normen worden gepubliceerd in het tijdschrift Biotechnic & Histochemistry.
Kleuring
De eenvoudigste manier is om het objectglaasje en het preparaat in een kleurstofoplossing te dompelen, vervolgens af te spoelen en te onderzoeken. De gebruikte kleurstoffen zijn gecertificeerde kleurstoffen, getest door de Commissie voor biologische kleurstoffen.
Bacteriën kleuren
Gramkleuring wordt gebruikt om bacteriën te classificeren. Het is gebaseerd op de samenstelling van hun celwand. Gramkleuring maakt gebruik van kristalviolet om de celwanden te kleuren, jodium als beitsmiddel en een tegenkleuring die alle bacteriën markeert.
Gram-positieve bacteriën kleuren donkerblauw of violet. Hun celwand mist het secundaire membraan en de lipopolysaccharidelaag die Gram-negatieve bacteriën wel hebben.
Op de meeste Gram-gekleurde preparaten zijn Gram-negatieve organismen rood of roze van de tegenkleuring.
Kleuring van weefsels
Hematoxyline- en eosinekleuring wordt vaak gebruikt in de histologie voor dunne weefselcoupes. Hematoxyline kleurt de celkernen blauw, terwijl eosine het cytoplasma, het bindweefsel en andere extracellulaire stoffen roze of rood kleurt.
Eosine wordt sterk geabsorbeerd door rode bloedcellen, waardoor deze helderrood kleuren. In een vakkundig gemaakt H & E-preparaat zijn de rode bloedcellen bijna oranje, en worden collageen en cytoplasma (vooral spieren) verschillende tinten roze. Hematoxyline kleurt de celkern en andere zure structuren (zoals RNA-rijke delen van het cytoplasma en de matrix van hyalien kraakbeen) blauw. Eosine daarentegen kleurt het cytoplasma en het collageen roze.
Een snelle en eenvoudige kleuring op bloeduitstrijkjes en menselijke wangcellen is methyleenblauw, dat de kernen kleurt. Er zijn vele andere gespecialiseerde vlekken, sommige fluorescerend onder speciaal licht.
Microscopisch beeld van een histologisch specimen van menselijk longweefsel gekleurd met hematoxyline en eosine
