Hij ging naar de Académie Royale des Beaux-Arts in Brussel. Peyo ging werken bij de Compagnie Belge d'Animation (CBA), een kleine Belgische animatiestudio. Daar ontmoette hij enkele van zijn toekomstige collega's, zoals André Franquin, Morris en Eddy Paape. Hij maakte zijn eerste strips voor de krant La Dernière Heure (Het Laatste Uur). Van 1949 tot 1952 tekent hij voor Le Soir Poussy, een stopverhaal over een kat. Voor dezelfde krant maakte hij ook Johan.
In 1952 stelde Franquin Peyo voor aan Le Journal de Spirou. Het was een door Dupuis uitgegeven kinderstripblad dat in 1938 voor het eerst in België verscheen. Peyo schreef en tekende veel personages en verhaallijnen. Zijn favoriet was Johan et Pirlouit (in het Engels vertaald als Johan en Peewit). Johan et Pirlouit speelt zich af in de Middeleeuwen in Europa, met in de hoofdrol een dappere jonge page van de koning en zijn trouwe, zij het opschepperige en bedriegende, dwerg. Johan verdedigt de zachtmoedigen op zijn trouwe paard, terwijl Peewit achter hem aan galoppeert op zijn geit, genaamd Biquette.
Smurfen
De eerste smurf verscheen in Johan en Peewit op 23 oktober 1958 in het album La Flûte à Six Schtroumpfs. Toen de smurfen populairder werden, begon Peyo begin jaren zestig een studio. Veel getalenteerde striptekenaars gingen aan de slag. De meest opvallende tekenaars uit deze studio zijn Walthéry, Wasterlain, Gos, Derib, Degieter en Desorgher.
In 1959 kregen de Smurfen hun eigen serie. Veel auteurs van de school van Marcinelle werkten samen aan het schrijven of als tekenaar. Onder hen Willy Maltaite (alias 'Will'), Yvan Delporte en Roger Leloup. Peyo werd meer een zakenman en toezichthouder. Hij liet zijn zoon, Thierry Culliford, de studio leiden. Zijn dochter Véronique was verantwoordelijk voor de merchandising.
De merchandising van de Smurfen begon in 1959. De PVC figuurtjes waren het belangrijkste tot eind jaren 1970. Toen, met het succes van de Smurfenplaten van Vader Abraham, kregen de Smurfen meer internationaal succes. Een deel van het speelgoed bereikte de Verenigde Staten. Hanna-Barbera maakte een zaterdagochtend animatieserie in 1981. Peyo was story supervisor.