De leefomstandigheden in het kamp waren verschrikkelijk, zoals gebruikelijk voor nazi-dodenkampen. Gevangenen kregen weinig te eten, niet genoeg kleding of onderdak om warm te blijven, hadden geen gezondheidszorg en werden mishandeld door de Ustaše bewakers. Zoals in veel kampen werden de omstandigheden tijdelijk verbeterd als er speciale groepen op bezoek kwamen. Toen bijvoorbeeld in februari 1942 leden van de pers op bezoek kwamen, en later toen in juni 1944 een delegatie van het Rode Kruis op bezoek kwam, werden de gevangenen beter behandeld totdat de bezoekers vertrokken. Daarna werden de levensomstandigheden weer normaal.
Voedsel
Zoals in alle vernietigingskampen van de nazi's was het voedsel dat de gevangenen in Jasenovac kregen niet voldoende om hen in leven te houden. Het soort voedsel dat zij kregen veranderde in de loop der tijd. In kamp Brocice kregen de gevangenen een "soep" van heet water met zetmeel voor het ontbijt, en bonen voor de lunch en het avondeten. (Deze "maaltijden" werden geserveerd om 6:00, 12:00 en 21:00 uur.) Het eten in kamp III was aanvankelijk beter, met aardappelen in plaats van bonen. In januari begonnen de gevangenen echter slechts één dagelijkse portie dunne "raapsoep" te krijgen. Tegen het einde van het jaar werd het dieet opnieuw veranderd, naar drie dagelijkse porties dunne pap van water en zetmeel. Er werden nog meer veranderingen aangebracht, maar de gevangenen kregen nooit genoeg voedsel om niet te verhongeren.
Water
Het water in Jasenovac was nog slechter dan in de meeste vernietigingskampen. Er was geen schoon water in het kamp. Gevangenen werden gedwongen water uit de rivier de Sava te drinken, dat besmet was met hren (mierikswortel).
Shelter
In de eerste kampen, Brocice en Krapje, sliepen de gevangenen in gewone concentratiekampbarakken. Deze waren van hout en hadden drie lagen bedden.
In Kamp III, waar ongeveer 3.000 gevangenen zaten, was er niet genoeg onderdak voor iedereen. Aanvankelijk sliepen de gevangenen op de zolders van de werkplaatsen van het kamp, in een open depot dat als "spoorwegtunnel" werd gebruikt, of gewoon in de open lucht. Korte tijd later werden acht barakken gebouwd. In zes van deze barakken sliepen de gevangenen. De andere twee werden gebruikt als "kliniek" en "ziekenhuis". Dit waren geen plaatsen waar gevangenen medische behandeling konden krijgen en beter konden worden. Het waren plaatsen waar zieke gevangenen werden samengebracht om te sterven of gedood te worden.
Gedwongen arbeid
Zoals in alle concentratiekampen moesten de gevangenen in Jasenovac ongeveer 11 uur per dag werken. Zij deden zware, gedwongen arbeid en werden altijd in de gaten gehouden door de Ustaše bewakers. Deze bewakers executeerden gevangenen, zelfs om kleine redenen, en zeiden dat de gevangenen "de arbeid saboteerden".
Ustasas Hinko Dominik Picilli en Tihomir Kordić controleerden de arbeidsafdeling. Picilli gaf de gevangenen persoonlijk zweepslagen om hen harder te laten werken. Hij verdeelde de "Jasenovac arbeidskrachten" in 16 groepen, waaronder groepen bouwvakkers, steenbakkers, metaalarbeiders en landarbeiders. Veel gevangenen stierven door het harde werk. Vooral het metselen was zwaar en gevaarlijk. Gevangenen die als smid werkten werden gedwongen messen en andere wapens voor de Ustaše te maken. Dijken bouwen was het meest gevreesde werk van allemaal.
Sanering
In het kamp was er geen sanitaire voorziening. Gevangenen hadden geen manier om alles schoon te houden, en moesten onder vreselijke omstandigheden leven. Bloed, braaksel en dode lichamen vulden de barakken. De barakken zaten ook vol ongedierte zoals luizen en ratten, die ziektes verspreidden. De barakken stonken verschrikkelijk omdat de gevangenen 's avonds een emmer als toilet moesten gebruiken. De emmer morste vaak.
Tijdens werkpauzes (van 5:00-6:00; 12:00-13:00, en 17:00-20:00) mochten de gevangenen hun darmen legen in openbare latrines. Dit waren grote kuilen die in het open veld lagen, bedekt met houten planken. Gedetineerden vielen er vaak in en stierven. De Ustaše moedigde dit aan door gevangenen de planken van elkaar te laten scheiden. Soms verdronken de Ustaše de gevangenen zelfs in de kuilen. Bij regen liepen deze kuilen over in het meer. Dit betekende dat urine en uitwerpselen zich vermengden met het water dat de gevangenen moesten drinken.
De gevangenen kregen vodden en dekens, maar die waren erg dun. De barakken waren ook niet voldoende om de gevangenen warm te houden van de kou. De kleren en dekens van de gevangenen werden zelden schoongemaakt. De gevangenen mochten ze één keer per maand snel wassen in het meer, behalve in de winter, wanneer het meer bevroor. Dan mochten gevangenen soms een paar kleren koken, maar niet goed genoeg om ze schoon te krijgen.
Door deze verschrikkelijke leefomstandigheden leden de gevangenen aan ziekten die leidden tot epidemieën van tyfus, tyfus, malaria, longinfecties, griep, dysenterie en difterie.
Bezittingen
De Ustaše namen de gevangenen alle kleren en andere spullen af. Ze kregen alleen gevangenisuniformen, gemaakt van lompen. In de winter kregen de gevangenen dunne "regenjassen" en mochten ze lichte sandalen maken. De gevangenen kregen een kleine persoonlijke eetkom, voor de 0,4 liter "soep" die ze te eten kregen. Een gevangene wiens kom ontbrak (omdat een andere gevangene hem had gestolen om hem als toilet te gebruiken) kreeg geen eten.
Tijdens delegatiebezoeken kregen gedetineerden kommen die twee keer zo groot waren als normaal, met lepels. Tijdens deze bezoeken kregen de gedetineerden ook gekleurde labels.
Angst
Gevangenen werden getroffen door een constante angst voor de dood, en vreselijke stress van het verkeren in een situatie waarin de levenden en de doden heel dicht bij elkaar staan.
Bij hun eerste aankomst in het kamp waren de gevangenen geschokt door de verschrikkelijke omstandigheden tijdens de reis naar het kamp en in het kamp zelf. De Ustaše verhoogde deze schok door een aantal gevangenen te vermoorden zodra zij in het kamp aankwamen, en door nieuwkomers tijdelijk onder te brengen in magazijnen, op zolders, in de treintunnel en buiten.
Nadat de gevangenen vertrouwd waren geraakt met het leven in het kamp, moesten zij wennen aan de ontberingen, mishandelingen, martelingen en de dood van andere gevangenen. Het levensgevaar was het grootst tijdens "publieke optredens voor publieke bestraffing", ook wel selecties genoemd. Gevangenen werden in groepen opgesteld, en enkelingen werden willekeurig aangewezen om gedood te worden terwijl ze tegenover de rest stonden. De Ustaše maakten dit nog erger door het proces lang te laten duren. Ze liepen rond en stelden vragen, keken naar gevangenen, kozen een persoon, veranderden vervolgens van gedachten en kozen een ander.
Gevangenen reageerden op twee manieren op hun verblijf in Jasenovac. Sommigen werden activisten. Zij vormden verzetsbewegingen (groepen die de Ustaše op verschillende manieren probeerden te bestrijden, zoals het stelen van voedsel, het plannen van ontsnappingen en opstanden, en het proberen in contact te komen met mensen buiten het kamp). Maar de meeste gevangenen reageerden door gewoon te proberen te overleven en ongedeerd de dag door te komen. Dit was niet "in de rij gaan staan om te slachten", maar eerder een andere strategie om te proberen te overleven.
Alle gevangenen leden aan een of andere vorm van geestelijke gezondheidsproblemen. Sommigen konden niet stoppen met denken aan eten; anderen werden paranoïde; sommigen hadden waanideeën; sommigen verloren de controle over zichzelf. Anderen leken hun gevoel van hoop te verliezen. Sommige gevangenen reageerden door te proberen te schrijven over wat er met hen gebeurde. Nikola Nikolić, Djuro Schwartz en Ilija Ivanović probeerden bijvoorbeeld allemaal gebeurtenissen, data en details te onthouden en zelfs op te schrijven. Dit was erg gevaarlijk, want op schrijven stond de doodstraf en het bijhouden van data was moeilijk.
De meeste executies van Joden in Jasenovac vonden plaats vóór augustus 1942. Daarna begon de ISC Joodse gevangenen te deporteren naar het concentratiekamp Auschwitz. In het algemeen werden Joden eerst vanuit alle delen van Kroatië naar Jasenovac gestuurd, nadat ze waren verzameld in Zagreb, en vanuit Bosnië en Herzegovina nadat ze waren verzameld in Sarajevo. Sommigen werden echter rechtstreeks vanuit andere steden en kleinere plaatsen naar Jasenovac gestuurd.